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原代细胞培养中的六个错误做法
点击次数:452 发布时间:2017-07-12

原代细胞培养与细胞株不同,两者在培养过程中的操作方法也不一样。这里对原代细胞操作过程中容易出现的6个错误及对应方法做一个说明。

以下六种做法都是不正确的,  有这些习惯的使用者们一定要注意改掉错误试验方法

1.长时间水浴解冻

因为原代细胞非常容易受到解冻过程的影响,所以在37℃水浴锅中解冻时,要在水中摆动溶解。在细胞半溶后(不要等到全部溶解),迅速拿到生物安全柜或超净台中,用1ml的枪,抽出事先准备好的完全培养基打入冻存管中,然后抽到培养瓶中,反复进行,直至完全溶解

         

2.把冻存管的细胞溶解后迅速离心
如果原代细胞溶解后马上离心,细胞所受的打击可能比DMSO的毒性还要大,不建议采用这个方法。用带有血清的完全培养基溶解后铺瓶,第二天换液去除DMSO。

3.让原代细胞长满(100%)瓶(皿、板)
原代细胞长满后,细胞会出现老化。因为原代细胞不是100%的细胞团,把混入的细胞控制在zui小限度非常重要。建议细胞长到90-95%进行传代

4.传代时用大量的胰蛋白酶处理
原代细胞传代时,要用低浓度的胰蛋白酶消化,在显微镜下看到细胞开始变圆、脱落后迅速终止胰蛋白酶。建议采用含10%血清的完全培养基终止或大豆由来的蛋白酶终止剂终止。

5.细胞培养后再冻存
原代细胞再冻存后,细胞会老化、也可能引起机能变化,所以不建议再冻存。细胞再冻存也是细胞死伤的主要原因。

6.原代细胞无限增殖

原代细胞和细胞系不同,增殖能力是有限的。为了防止遗传上的变化,zui好尽快开始做实验。另外,为了防止混入杂细胞比例的增加,要经常观察细胞形态