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NanoDrop 2000分光光度计采用的工作原理特性是哪些?
点击次数:7326 更新时间:2019-04-23
   NanoDrop 2000分光光度计的原理是分子中某些基团吸收紫外可见辐射后,电子能级跃迁产生的吸收光谱。由于各种材料不同的分子、原子和不同的分子空间结构,光能量的吸收,它不会是相同的结果,每个材料都有其*的、固定的吸收光谱曲线,根据一些特征吸收光谱波长的吸光度的歧视或确定材料的内容,这就是分光光度定性和定量分析的基础。
 
  NanoDrop 2000分光光度计原理使用说明
 
  (1)预热是保证仪器精度和稳定性的重要步骤。
 
  (2)试管的洁净度直接影响实验结果。因此,洗碗是特别重要的。用自来水反复冲洗用过的小杯,再用蒸馏水冲洗,倒立在滤纸上,晾干后放回小杯盒中。如有必要,对对比色盘进行更细致的处理,如用浓硝酸或铬酸洗液浸泡,冲洗干净。
 
  (3)试管与分光光度计应同时使用,否则会造成较大的实验误差。不能用刀代替1.37200光栅分光光度计。
 
  (4)彩皿中的液体应达到其容量的2/3,太少会影响实验结果,太多会在测量过程中容易溢出并污染仪器。试管内的样品装载量应在2/3和3/4之间。
 
  (5)在操作小杯时,应抓住“粗糙表面”,防止与“光滑表面”接触而通过光路。如果小杯表面有液体,用丝绸布擦干,以确保不会影响平滑的路径。
 
  (6)待测溶液浓度过高时,应选用光径较短的试管。吸光度读数一般应在0.1 ~ 0.8之间。由于毛坯的测量、标准和溶液的测试使用的是相同光径的试管,所以不需要考虑光径变化所带来的影响。
 
  在NanoDrop 2000分光光度计的测定过程中,发现同一溶液在不同时间的测定结果不同,即重复性不佳。造成这种差异的原因是什么?除判断错误的因素外,可能的原因如下:
 
  1、可见光分光光度计预热时间不够或预热方法不正确,应延长预热时间或使用正确的预热方法。
 
  2、由于长期使用,光电变换器的光电转换效率发生了变化。此时标准溶液和待测溶液的吸光度均降低,在相对定量的情况下对结果影响不大。但是,对于这类仪器,一般建议连续使用时间不超过3h,如果需要较长时间,间歇使用30min。
 
  NanoDrop 2000分光光度计的其他问题
 
  1、发现在测量过程中一些不良操作不利于仪器的维护,用户应尽量避免。如对上述仪器进行操作(如浇注溶液);吸收器置于仪器的表面板上。在实验室中与不同仪器的吸收罐混合使用。
 
  2、防尘防潮,分光光度计NanoDrop 2000一般采用塑料布盖,不使用时将整个仪器盖住,是一种很好的防尘方法。然而,我发现很多实验室并不需要附加一个塑料布盖,但是我使用的是普通的布盖或由布盖制成的仪器,除尘效果不如塑料布盖理想。此外,在塑料布盖上只放几袋防潮硅胶,也能更好地发挥延长防潮效果。在防潮时,如果可见分光光度计带有防潮干燥筒,应经常检查,发现变色后立即更换新的或待干燥后再使用。
 
  NanoDrop 2000分光光度计种类繁多,但有三种类型:简单型、中等类型和类型。选择分光光度计时需要考虑以下几个方面:
 
  1、波长检测范围和波长选择方法:仪器波长检测范围越宽,价格越高,当然用户需要根据自己的需要选择合适的波长范围;对于简单的仪器,波长的选择方法一般是手工搜索,这种重复性较差,仪器中的波长可以根据自动搜索或扫描的方式设置,第二种类型的波长扫描速度齿轮也会增加。
 
  2、梁式:梁式可分为单梁式、双梁式或准双梁式。单光束一般适用于测量给定波长的吸光度,不能用于全光谱扫描。双光束可自动记录,快速全波段扫描。它可以消除光源不稳定、探测器灵敏度变化等因素的影响,特别适用于结构分析;伪双光束的优点是可以监测光源变化引起的误差。其原理是将同一单色仪发出的光分为两束,一束直接到达检测器,另一束通过样品后到达检测器。但是,这种方法并没有消除引用的影响。
 
  3、光源:钨丝灯和卤钨灯(320 ~ 2500nm)主要用于可见光区;紫外区主要采用氢灯和氘灯(180-375nm)。氙气灯可作为紫外和可见光的光源。
 
  4、样本支持:简单样本支持为推拉四连杆池框架,一次只能测量一个样本,基准和样本两次测量;样品池支架的类型为两种固定类型,分别为样品通道和参考通道,可以同时测量参考和样品的吸光值。
 
  5、狭缝:简单的狭缝类型一般为定宽模式,狭缝宽度大多为2nm,或1.5nm;该仪器的狭缝是连续可调的,可适应高分辨率的需要。
 
  6、光学性能指标:光学性能的好坏直接影响测量的精度,其中光栅的技术指标尤为重要。光栅质量较好,一般光栅为凹面光栅,与大尺寸凹面光栅对应的凹面光栅槽数较多,因此分辨率和杂散光指数优于简单仪器。
 
  7、检测器:检测器是将光信号通过溶液转换成电信号,利用光电效应放大电信号的装置。简单仪器一般采用光电二极管;中间型仪器采用硅光电二极管;I型仪器使用高灵敏度光电倍增管和红外探测器。
 
  8、显示:简易仪器大多为机械表头或数码管显示,无数据处理器;仪器显示为液晶显示或与计算机连接,数据处理可由仪器本身或外部计算机进行。
 
  9、测量方式:NanoDrop 2000分光光度计主要是定点(固定波长)吸光度或透射率测量,波长扫描测量基本不可能;可显示透射率、吸光度、浓度直读、单光束、单点扫描。
 
  10、测量附件:测量仪器质量的一个重要方面是看仪器是否有丰富的辅助测量设备,如偏振附件、积分球附件、反射附件、自动采样器附件、色度分析软件、薄膜附件等。
 
  11、被测样品状态:NanoDrop 2000分光光度计一般测量液体样品,红外分光光度计一般可以分析各种状态的样品(气体、液体和固体)。