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传代细胞的操作方法
点击次数:1345 更新时间:2016-07-12
 一.贴壁细胞

1. 客户接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。

3. 显微镜观察细胞,当细胞融汇80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

4. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。

5. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。

6. PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。 

7. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2  培养。

二.悬浮细胞

1. 接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。

3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。

4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。

5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2  培养。